药物抗肿瘤细胞多药耐药相关研究技术

 时间:2026-02-14 22:19:32

1、细胞经药物处理后,加入PBS,离心,重悬于含10%FBS培养基中。

药物抗肿瘤细胞多药耐药相关研究技术

2、加入罗丹明-123或柔红霉素,对照组加PBS,37℃暗处孵育1h。(荧光染料与细胞培养后,通过流式细胞仪测定荧光信号强度,可反映细胞内药物浓度,与对照组比较,即检测细胞的药物输出功能,判断细胞的耐药程度。)

药物抗肿瘤细胞多药耐药相关研究技术

3、用冷冻的培养基于4℃离心2次,5min。

药物抗肿瘤细胞多药耐药相关研究技术

4、重悬于冷PBS中,随后用流式细胞仪检测。

药物抗肿瘤细胞多药耐药相关研究技术

1、在预先培养24h,生长良好的细胞悬液中加入一定量的待测药物,培养24h后,用PBS洗3次,去上清液。

药物抗肿瘤细胞多药耐药相关研究技术

2、加蒸馏水,反复冻融使细胞破裂,混匀,高速离心30min,上清液供HPLC分析。

药物抗肿瘤细胞多药耐药相关研究技术

3、HPLC法检测时选择最佳的色谱条件,以待测药物不同浓度的标准液绘制浓度-峰高标准曲线,再检测细胞液,通过标曲,得到药物浓度。

药物抗肿瘤细胞多药耐药相关研究技术

1、取肿瘤细胞,采取异硫氰酸胍-酚-三氯甲烷法提取总RNA。

2、含总RNA,OLigo(dT)引物,转绿缓冲液,RNase抑制剂,逆转录酶逆转录体系中制备cDNA。

3、进行PCR,MDR1引物,进行30个循环的变形(94℃,45s)-退火(60℃,45s)-延伸(72℃,1min)。

4、扩增得到的cDNA可用凝胶扫描仪在1.5%琼脂多糖凝胶上以溴化乙锭染色并分析。内参为beta-actin。

5、用灰度分析软件分析mRNA的表达水平。

1、western-blot:样品分离转膜杂交,显色检测

药物抗肿瘤细胞多药耐药相关研究技术

2、流式细胞术,检测蛋白含量信息。

药物抗肿瘤细胞多药耐药相关研究技术

1、制备胞质膜,以硫酸亚铁钼蓝显色法测定ATP水解产生的磷酸,并做动力学分析。

  • 怎样防止耐药菌株产生
  • 易瑞沙耐药后的应对策略。
  • 肿瘤如何预防
  • 肿瘤是怎么形成的
  • 咳嗽耐药怎么办
  • 热门搜索
    缺钾会有什么症状 节妇的悠闲生活 人肉搜索怎么搜 生活如此多娇 幻灯片如何自动播放 天津农学院怎么样 剑灵捏脸数据怎么导入 微信如何加更多好友 爱情是什么 1是什么意思