涂片。
首先在载玻片上滴一小滴蒸馏水，用灼烧过的接种针挑取少量细菌，置载玻片的水滴中与水混合并涂抹开，注意涂抹要均匀平坦，涂抹后直径约为1 cm的薄层。
固定。
将载玻片在火焰上方快速来回通过一两次，以载玻片的加热面接触手背皮肤，不觉过烫为佳，待冷却后再在火焰上方来回通过一两次，再冷却，这样重复操作直到薄层干了为止。
染色。
在制好的片上滴一滴草酸铵结晶紫，染色1 min后用水洗，注意水流不要直接对准薄层。
媒染。
加路哥式碘液大概一滴，作用1 min后用水冲洗，注意流水不要直接往薄层上冲，用过滤纸吸干。
脱色。
用95%乙醇脱色，一般脱色时间大概为30 s。这一步是革兰氏染色的关键，必须严格掌握好，如果脱色时间过长则会把阳性菌误认为阴性菌；如果脱色不够则容易被误认为是阳性菌。
水洗后用过滤纸吸干。
复染。
滴加0.5%的番红染色一滴，液染色10～30 s后，用自来水冲洗。
观察。
干燥后，用油镜镜检观察，并做好记录。
过程示意图如下：
结果对照图如下：
（1）革兰氏阳性菌效果图
（2）革兰氏阴性菌效果图
