1、液超低温保藏法是抱菌种装在含有冷冻保护剂的安瓿瓶内,将该安瓿瓶放入液氮(-196℃中保藏。由于菌丝体处于-196℃,其代谢降低到完全停止的状态。所以不需定期移植。液氮超低温保藏法是菌种长期保藏的最有效最可靠的方法。具体操作如下。
2、菌种制备菌种在PDA培养基平板上于22-2℃下培养10-15天,菌丝体充分生长后,用打孔器(直径2~4毫米)切割琼脂块,或用手术刀片把菌丝培养物切成2毫米×4毫米长方形小块。
3、安瓿管制备安瓶管的玻炬谯辙枇璃,要能经受温度突变而不破裂,容易用火焰熔封管口,恢复培养时容易打开般采用硼硅玻璃,管的大小根据需要而定,通常是75筱陶蜴又毫米×10毫米或能容1.2毫升液体的安瓿瓶比较合适。选好安瓿管后,用印油书写欲保藏的食用菌菌种的菌号于管壁上,160℃干热灭菌,使印记牢固地固定在管壁上
4、保护剂每管加进0.8毫升高压灭菌的10%的甘油水液或10%二甲亚砜水溶液可作为冷冻保护剂。用无菌镊子将这科带有菌丝体的琼脂块移入加有保护剂的安瓿管中。用火焰将安瓶上部熔封,浸在水中检查有无漏气。
5、液氮保藏把已做好的安瓿菌种管放入具有孔洞的小塑料瓶中(在塑料瓶的底部放一块铁片,使塑料瓶连同安瓿管能一起可入液氮罐中),盖好瓶盖,在瓶盖上连接一条细绳并作记号,以提出所需的菌种。
6、把装有安瓿管的塑料瓶吊在液氮罐口上,使安面管缓慢地降温巳呀屋饔,大约30分钟后,把安瓿管浸入液氮中进行长期保存。启用液氮罐中保存的菌种时,应先将安瓿瓶置于35~40℃的温水中,使瓶内的冰块迅速融鞅瓞慈玢解,然后在无菌条件下开启安瓿瓶用接种针取菌块移接于适宜的培养基上,置22-24℃活化培养,
